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        Green Taq Mix-V20.1.pdf

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        2021-01-14 15:06:12
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      Green Taq Mix

      GreenTaqMix??擴增性能極強的DNA聚合酶??模板適應性強,可兼容多種復雜模板優化的緩沖體系,有效抑制非特異性擴增帶綠色染料,反應結束后產物可直接進行電泳??以煙草、棉花、小麥、水稻、擬南芥、大豆、人的基因組,HeLa細胞cDNA,菌液和小鼠裂解液為模板擴增0.5kb-3.3kb的目的片段,在默認條件下,所有片段均可實現高效擴增。GreenTaqMix對不同的模板都有較好的兼容性。??本
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      貨號:
      P131-01/02/03
      所屬分類
      普通PCR
      數量:
      -
      +
      庫存:
      89986
      暫時無貨
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      產品詳情
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      組分
      說明書

      Green Taq Mix

      擴增性能極強的DNA 聚合酶

       

      模板適應性強,可兼容多種復雜模板

      優化的緩沖體系,有效抑制非特異性擴增

      帶綠色染料,反應結束后產物可直接進行電泳

      以煙草、棉花、小麥、水稻、擬南芥、大豆、人的基因組,HeLa 細胞 cDNA,菌液和小鼠裂解液為模板擴增 0.5kb-3.3 kb 的目的片段,在默認條件下,所有片段均可實現高效擴增。 Green Taq Mix 對不同的模板都有較好的兼容性。

      本產品是一款包含Taq DNA Polymerase、dNTPs 以及優化緩沖體系的2 × Master Mix,只需加入引物和模板即可進行反應,減少了移液操作引起的誤差,同時提高了通量和結果的重現性。經過優化的緩沖體系能夠有效抑制非特異性擴增和引物二聚體的產生。體系中加入的保護劑使得Mix 經過反復凍融后仍可保持穩定的活性。本品中含有綠色染料,可在反應結束后直接進行電泳。PCR 產物的3’ 端帶A,可克隆至載體,并適用于ClonExpress® 快速克隆試劑盒(C112/C113/C115/C601)。

      組分 P131-01 P131-02 P131-03
      Green Taq Mix 5 ml 15 ml 50 ml

      -20℃保存。

       

      關鍵詞:
      P131-0
      擴增性能極強的DNA聚合酶
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:擴增效率低,實驗組無擴增條帶。

      A1:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解;引物設計是否合理,可利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

      (2) 模板

      長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;模板GC含量過高會導致DNA的雙鏈無法打開,此時加入PCR Enhancer(貨號P021),可以有效降低解鏈溫度;模板的GC含量過低會導致擴增效率較差,可適當延長引物長度或通過梯度PCR摸索合適的反應條件;模板中存在抑制物,特別是甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,會造成DNA脫嘌呤而影響PCR結果,建議稀釋使用或重新制備;若模板為cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度。

      (3) 酶

      反應所用的酶因保存或運輸不當而失活,建議更換新酶或用另一來源的酶重新實驗。

      (4) 擴增體系

      反應體系配制錯誤,建議重復實驗。

      (5) 反應程序

      檢查變性溫度是否準確,PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符。如果溫度過高,酶在前幾個循環就迅速失活;溫度過低則模板變性不徹底??蓪ν嘶饻囟仍O置梯度,摸索最佳的退火溫度。檢測延伸時間是否充足。

      (6) Mg2+濃度不合適

      Mg2+濃度過低可影響PCR產量甚至使PCR擴增失??;Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,應適當調整Mg2+濃度。

      Q2:擴增的條帶亮度不太亮。

      A2:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解。

      (2) 模板

      首先確認模板的質量,長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;如果模板沒有了,可用首次擴增產物按倍比稀釋后作為模板進行二次擴增。

      (3) 酶

      可適當提高酶的使用量。

      (4) 反應程序

      可嘗試使用Touch Down程序;延長延伸時間,提高循環數。

      Q3:擴增特異性差,非特異性擴增。

      A3:(1) 引物

      引物設計不夠優化。引物與靶序列有非特異性互補或自身聚合成二聚體,可降低引物濃度進行優化,必要時重新設計引物。

      (2) 模板

      模板不純,被污染,需重新制備模板。

      模板降解或過量,通過電泳檢查模板完整性及濃度,必要時重新純化模板。模板的使用量請參考說明書。

      (3) 反應程序

      反應程序不夠優化。如果出現比目的條帶小的雜帶,可通過提高退火溫度,降低循環數調整;如果出現比目的條帶大的雜帶,可縮短延伸時間、降低循環數。

      (4) 酶

      酶量加入過多。Taq系列:50μl體系加2U。

      Q4:空白對照出現擴增產物。

      A4:(1) 引物設計不合理

      擴增序列與非目的擴增序列有同源性,PCR也可以擴增出非靶序列的序列。

      (2) 若擴增產物條帶大小與目的條帶一致,說明有污染

      更換新的Mix、水或引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染。

      (3) 為了避免靶序列受到整個基因組或大片段的交叉污染,操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

      (4) 為了避免靶基因受到空氣中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法減輕或消除污染。

       

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