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      科學研究試劑

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      • P311 P312-V9.2.pdf

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        2020-06-30 23:24:10
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      2 ×Vazyme LAmp Master Mix

      2×VazymeLamp?MasterMix??長距離PCR的明燈??高效擴增>20kb的基因組、cDNA片段極高的擴增靈敏度,對于低純度模板具有很強的耐受度廣泛的GC適應性?提供即用型的預混液,最大程度地減少實驗步驟???圖一極高的擴增性能以10ng不同種屬的基因組DNA為模板,用VazymeLAmp??DNAPolymerase擴增長度為3.6-21.0kb的目的片段。?M.DL15000Ma
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      P311-01/02/03
      所屬分類
      長片段PCR
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      +
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      89991
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      2 ×Vazyme LAmp® Master Mix

      長距離PCR 的明燈

      高效擴增>20 kb 的基因組、cDNA 片段

      極高的擴增靈敏度,對于低純度模板具有很強的耐受度

      廣泛的GC 適應性

      提供即用型的預混液,最大程度地減少實驗步驟

      圖1. 極高的擴增性能

      以10 ng不同種屬的基因組DNA為模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase擴增長度為3.6-21.0 kb的目的片段。

      M. DL15000 Marker(Vazyme #MD103)

      圖2. 超強的擴增靈敏度

      以500 ng-0.5 ng 的棉花基因組DNA 為模板,擴增11.5kb、17.2 kb 的片段。PCR 反應結束后取10 ul 進行電泳檢測。

      圖3. 廣泛的模板適用性

      以10 ng 人、水稻、大豆、棉花基因組DNA為模板,擴增3.6 kb-21 kb 的片段,PCR 反應結束后取10 ul 進行電泳檢測。

      圖4. 廣泛的GC含量適應性:可以擴增GC含量27%至78%的不同片段

      以10 ng的人基因組為模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase分別擴增GC含量27%至78%的不同片段。

      Vazyme LAmp® DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’→5’外切酶活性的蛋白組成的混合酶,保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合特別優化的緩沖體系,Vazyme LAmp® DNA Polymerase非常適合長片段的擴增,可從基因組中擴增長達21kb的 片段,并且對不同來源、不同長度的模板均具有很高的擴增效率。PCR產物的3’端帶A,可克隆至T載體。附帶的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的擴增。

      組分

      P311-01

      P311-02 

      P311-03

      2 × Vazyme LAmp® Master Mix

      1ml

      5ml

      15ml

      -20℃保存。

      關鍵詞:
      P311-01/02/03
      長距離PCR的明燈
      長距離PCR的明燈
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:擴增效率低,實驗組無擴增條帶。

      A1:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解;引物設計是否合理,可利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

      (2) 模板

      長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;模板GC含量過高會導致DNA的雙鏈無法打開,此時加入PCR Enhancer(貨號P021),可以有效降低解鏈溫度;模板的GC含量過低會導致擴增效率較差,可適當延長引物長度或通過梯度PCR摸索合適的反應條件;模板中存在抑制物,特別是甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,會造成DNA脫嘌呤而影響PCR結果,建議稀釋使用或重新制備;若模板為cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度,逆轉錄時只用引物Oligo dT。

      (3) 酶

      反應所用的酶因保存或運輸不當而失活,建議更換新酶或用另一來源的酶重新實驗。

      (4) 擴增體系

      反應體系配制錯誤,建議重復實驗。

      (5) 反應程序

      檢查變性溫度是否準確,PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符。如果溫度過高,酶在前幾個循環就迅速失活;溫度過低則模板變性不徹底??蓪ν嘶饻囟仍O置梯度,摸索最佳的退火溫度。檢測延伸時間是否充足。

      (6) Mg2+濃度不合適

      Mg2+濃度過低可影響PCR產量甚至使PCR擴增失??;Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,應適當調整Mg2+濃度。

      Q2:模板是cDNA,可以用來擴長片段嗎?

      A2:可以,但要保證cDNA確實有這樣的長度,即RNA質量必須要好,逆轉錄時只用引物Oligo dT。

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