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      • N601-說明書.pdf

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        2020-06-30 12:19:08
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      Discover-sc Single Cell Kit

      Discover-scSingleCellKit高靈敏度:可以從單個細胞或者極微量的基因組樣本中實現全基因組擴增。高覆蓋度:單細胞基因組經擴增后可達到95%以上的覆蓋度。高均一度:基于無偏好性MDA的擴增,可實現全基因組的均一擴增。高保真度:Phi29DNA聚合酶具有優于目前大多數高保真酶的保真度。高產量:6-8小時的反應可以產生30-40μg的基因組DNA。操作簡單:僅需3步反應,操作時間少于1
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      說明書

      Discover-sc® Single Cell Kit

      高靈敏度:可以從單個細胞或者極微量的基因組樣本中實現全基因組擴增

      高覆蓋度:單細胞基因組經擴增后可達到95%以上的覆蓋度

      高均一度:基于無偏好性MDA的擴增,可實現全基因組的均一擴增

      高保真度:Phi29 DNA聚合酶具有優于目前大多數高保真酶的保真度

      高 產 量:6-8小時的反應可以產生30-40 µg的基因組DNA

      操作簡單:僅需3步反應,操作時間少于10分鐘

      設備要求低:只需水浴鍋即可完成整個反應

      1.擴增產品的廣泛適用性

      Discover-sc® Single Cell Kit擴增產物分布于2-100 kb,平均產物大小

      大于20 kb,廣泛適用于二代測序、大片段拷貝數變異分析、微衛星分析、

      qPCR分析、基因芯片分析、Array CGH等多種下游分析。左圖是Discover-sc® 單細胞試劑盒擴增產物電泳結果。

      M:marker;

      C:單細胞擴增產物;

      D:基因組擴增產物;G:未經擴增的基因組DNA。

      2.反應體系的高靈敏度!高覆蓋度!高均一度!

      Discover-sc® Single Cell Kit使用優化的反應體系,可以實現單細胞的全基因組擴增,在保證覆蓋度與均一度的情況下,對純化的真核生物基因組DNA的擴增靈敏度可達1 ng,細菌基因組可達10 pg。右圖是Discover-sc® Single Cell Kit全基因組擴增產物均一度與覆蓋度檢測結果。使用分布于不同染色體的8對引物通過多重PCR檢測Discover-sc® Single Cell Kit全基因組擴增產物均一度與覆蓋度。擴增產物顯示與未擴增基因組一致的均一度與覆蓋度。

      M:marker;

      C:單細胞擴增產物;

      D:基因組擴增產物;

      G:未經擴增的基因組DNA;

      NC:陰性對照。

      3.極高的擴增產量

      Discover-sc® Single Cell Kit單個擴增反應可以產生30-40 µg的全基因組DNA,可以進行大量的平行實驗分析。下圖是分別以單細胞和10 ng純化的基因組DNA為起始模板的擴增產物累積曲線圖。

      4.穩定的反應體系!均勻的產物累積!

      Discover-sc® Single Cell Kit可以在微量樣本的擴增中,實現產物均勻累積,擴增可以根據時間及產量需要在不同時間結束并拿到高覆蓋度高均一度的全基因組DNA。并且在30℃下反應24小時不影響產物質量。下圖是單細胞經不同時間擴增后產物基因組覆蓋度與均一度檢測結果。

      M:Marker;

      G:未經擴增的基因組DNA;

      NC:陰性對照。

      5.超指數的擴增原理

      6.超簡易的操作流程

      Discover-sc® Single Cell Kit是基于多重鏈置換擴增(MDA)的Phi29等溫擴增體系。Phi29DNA聚合酶是從噬菌體中克隆的DNA聚合酶,具有很強的鏈置換活性,可以在體外進行不依賴于熱循環的恒溫DNA聚合反應,單次聚合反應可以實現長達100 kb的連續聚合延伸。Phi29 DNA聚合酶具有很強的3’-5’外切酶活性,這保證了DNA合成的高保真性,Phi29 DNA聚合酶的保真度是Taq酶的1000倍,高于目前絕大多數高保真酶的保真度。本試劑盒使用優化的Phi29 DNA聚合酶反應體系實現高靈敏度的單細胞全基因組恒溫擴增。適用于從單細胞、少量組織或者微量純化的基因組DNA進行全基因組擴增,以得到大量的高覆蓋度的基因組DNA。

      組分 N601-01 (24 rxn) N601-02 (96 rxn)
      Discover-sc® DNA Polymerase 48 μl 192 μl
      Discover-sc® Reaction Buffer 750 μl 3 × 1 ml
      Buffer D 1 ml 2 × 1 ml
      Buffer N 1 ml 2 × 1 ml
      DTT, 1M 1 ml 1 ml
      PBS 1 ml 2 × 1 ml
      H2O 1 ml 2 × 1 ml

      -20℃儲存,如需更長期儲存請于-70℃以下存放。

      關鍵詞:
      Discover-sc Single Cell Kit
      N601-01/02
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:單細胞基因組擴增時,在獲得單細胞后不立即進行擴增,細胞該如何保存?

      A1:可以將單細胞分離到4ul的PBS中,再將樣品于-70℃或更低溫保存,取出后請立即進行后續的反應。

      Q2:單細胞基因組擴增陰性對照產生10-40ug DNA,為什么下游檢測結果為陰性(qPCR)? 

      A2:無模板的陰性對照反應中,由引物的隨機聚合延伸產生的高分子量DNA產物,這種產物不影響目的產物的質量及下游分析。

      Q3:單細胞基因組擴增陰性對照產生10-40ug DNA,為什么下游檢測結果為陽性(qPCR)?

      A3:可能存在交叉污染,由于本反應對微量DNA非常敏感,替換掉所有可能被DNA污染試試劑及用品。  

      Q4:人的單細胞基因組擴增后的產物怎樣檢測擴增均一性?

      A4:可以采用qPCR的方法檢測擴增均一性。諾唯贊有相關的檢測人16條常染色體擴增產物均一性的產品,詳情請咨詢業務員。

      Q5:一些特殊的細胞,如植物細胞或者線蟲卵母細胞,能否使用N601?

      A5:植物單細胞含有細胞壁,需要先去除細胞壁再使用。而線蟲卵母細胞細胞膜外包裹有一層殼,可直接嘗試使用。如果擴增效果不好,可先將細胞膜外包裹的殼酶解掉,再進行擴增。

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