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      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

      藥物研發試劑

      • NR801 說明書.pdf

        大?。?/span>
        2020-12-08 17:24:50
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      VAHTS Small RNA Library Prep Kit for Illumina

      VAHTSTM?SmallRNALibraryPrepKitforIllumina?smallRNA-seq文庫構建試劑盒樣本兼容范圍廣種類廣:動、植物細胞/組織總RNA,分離純化的smallRNA,以及其他類型的總RNA(如外泌體總RNA),均可作為起始模板;起始量廣:兼容100ng-1μg總RNA的投入量。文庫豐度高:接頭污染少,最終有效文庫比例高,miRNA比例高、涵蓋種類多。多種純化方式可
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      NR801-01/02
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      組分
      說明書
      VAHTS® Small RNA Library Prep Kit for Illumina

      small RNA-seq文庫構建試劑盒

      樣本兼容范圍廣:

      種類廣:動、植物細胞/組織總RNA,分離純化的small RNA,以及其他類型的總RNA(如外泌體總RNA),均可作為起始模板;

      起始量廣:兼容100 ng-1 μg總RNA的投入量。

      文庫豐度高:

      接頭污染少,最終有效文庫比例高,miRNA比例高、涵蓋種類多。

      多種純化方式可選:

      試劑盒包含文庫構建所需的所有組分,提供磁珠分選和PAGE膠分離兩種文庫純化方式,可根據初始文庫質量任意選擇。

      精心優化的反應體系:

      單管操作,文庫產量高,平行重復相關性好。

      圖A:以1 μg小鼠肝臟總RNA為起始模板的small RNA文庫;

      圖B:以1 μg小鼠肝臟總RNA為起始模板的small RNA文庫經PAGE分離后的最終文庫;

      圖C:以80 ng HeLa細胞培養物上清外泌體總RNA為起始模板的samll RNA文庫。

      VAHTS® Small RNA Library Prep Kit for Illumina是針對Illumina高通量測序平臺定向開發的small RNA文庫構建專用試劑盒。本試劑盒適用于模板起始量為0.1-1 μg的動、植物總RNA,以及分離純化的small RNA。small RNA的3’和5’端分別連上通用接頭,再經過逆轉錄、PCR擴增以及PAGE膠或磁珠純化等步驟,最終得到適用于Illumina平臺的測序文庫。試劑盒包含文庫構建及純化所需的所有酶和緩沖液,所有組分都經過了嚴格的質量控制和功能驗證,最大程度上保證了文庫構建的穩定性和重復性。

      組分 NR801-01 (24 rxn) NR801-02 (96 rxn)
      RL3 Adaptor 24 μl 96 μl
      RL3 Buffer 240 μl 960 μl
      RL3 Enzyme mix 72 μl 288 μ
      RT Primer 24 μl 96 μl
      RL5 Adaptor 24 μl 96 μl
      RL5 Buffer 24 μl 96 μl
      RL5 Enzyme mix 60 μl 240 μl
      RT Buffer 192 μl 768 μl
      RT Enzyme mix 48 μl 192 μl
      Amplification mix 3 1.2 ml 4 × 1.2 ml
      pBR322/MspI digest DNA Marker 120 μl 480 μl
      6 × Loading Buffer 500 μl 2 × 1 ml
      Co-precipitator 120 μl 480 μl
      RNase-free H2 O 500 μl 2 × 1 ml
      GE Buffer 6 ml 24 ml
      Filtration Column 24 個 96 個

      RL5 Adaptor,-70°C儲存;Filtration Column,室溫儲存;其余組分,-20°C儲存。

      關鍵詞:
      VAHTS Small RNA Library Prep Kit for Illumina?
      NR801-01/02
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:small RNA建庫上機策略?

      A1:單端測序,采用雙端測序會導致數據量偏低

      Q2:small RNA建庫,能否不采用切膠方法,而采用磁珠分選的方法?

      A2:磁珠分選的方法不能得到單一的目的條帶,建議使用切膠方式

      Q3:除Ttrizol裂解法提取總RNA外,能否使用離心柱法提取的總RNA作為起始模板?

      A3:本試劑盒對總RNA的提取方式無特殊要求,如使用離心柱法提取試劑盒提取總RNA,請確保所使用的提取試劑盒不會損失small RNA。

      Q4:RT primer能否在cDNA合成步驟添加?

      A4: 不能。3’接頭連接完成后加入的RT primer與多余3’接頭反向互補形成雙鏈結構,可以有效阻止5’接頭與3’接頭連接,從而減少接頭二聚體的形成;另外,RT primer與已連上3’接頭的RNA底物方向互補可作為逆轉錄步驟的引物,因此RT primer必須在3’接頭連接完成之后添加,不能在cDNA合成步驟才添加。

      Q5:除常規的動植物總RNA外,其他類型的總RNA是否可以作為起始模板進行文庫構建?

      A5:除動、植物總RNA以及分離純化的small RNA外,本試劑盒可以兼容其他類型的總RNA,比如外泌體總RNA作為起始模板。

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      VAHTS DNA Clean Beads
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