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      Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

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      • P621-說明書-V20.1.pdf

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        2020-12-22 11:19:14
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      Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

      SingleCellSequenceSpecificAmplificationKit用于單細胞或微量總RNA中轉錄組的擴增適用于1-10000個細胞一步法RT-PCR預擴增最高可擴增500個靶基因擴增產物適合用任何實時熒光定量PCR儀分析高靈敏度,低成本???SingleCellSquenceSpecificAmplificationKit是基于一步RT-PCR的擴增方法,實現單細胞或者微量總RN
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      P621-01
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      說明書

      Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

      用于單細胞或微量總RNA中轉錄組的擴增

      適用于1-1000個細胞

      一步法RT-PCR預擴增

      最高可擴增500個靶基因

      擴增產物適合用任何實時熒光定量PCR儀分析

      高靈敏度,低成本

      Single Cell Squence Specific Amplification Kit 是基于一步RT-PCR的擴增方法,實現單細胞或者微量總RNA中轉錄組的擴增,檢測單個細胞之間不同基因的表達水平。本試劑盒實現了細胞裂解、RNA逆轉錄和PCR反應在同一管內完成,不需要額外的移管操作,具有節約時間、減少實驗誤差、降低污染、提高靈敏度等優勢。

      組分 P621-01 (200 rxn)
      2 × Reaction Mixa 500 μl
      RT/Taq enzymeb 20 μl
      Nuclease-free ddH2 O 2 × 1.25 ml

      -30 ~ -15℃保存。-20 ~ 0℃運輸。

      關鍵詞:
      Single Cell Sequence Specific Amplification Kit
      P621-01
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:1.5μl反應體系加入多少樣本的體積?

      A1:5μl的反應體系下,加入的樣本體積最好不要超過0.5μl,如果樣本體積較大,建議適當增大反應體系。

      Q2:整個體系能否減半?

      A2:可以,但是不建議,一步法體系較為復雜,大體系做效果更好。

      Q3:真的可以適用于一個細胞的定量嗎?檢測的基因數量最多可以達到多少?會不會造成擴增偏好性?

      A3:單細胞是可以的,亦可用于2-1000 cells或10 pg-100 ng RNA的樣品;最多可混合500對不同基因的擴增引物;關于擴增偏好性,只要根據細胞數控制好循環數,不會造成偏好性。

      Q4:樣本不是分散開的細胞,而是一小塊組織,可不可以用呢?組織是否可用裂解液進行裂解細胞?

      A4:可以的,但是組織塊不能太大,大約有幾十個細胞量的組織塊是可以的,但是超過這個范圍,目前還沒有案例。該產品反應體系只有5μl,不兼容細胞裂解液,大量的裂解液會影響反應的進行,可以將組織進行液氮速凍,直接投入到反應體系即可。

      Q5:引物可以使用Oligo dT或隨機引物嗎?

      A5:不可以,因為該產品是RNA提取純化、逆轉錄和PCR反應在同一管內完成,如果使用Oligo dT或隨機引物無法達到預擴增的目的。

      Q6:引物設計有何要求。

      A6:(1) 除了要符合常規的PCR引物設計要求外,還要注意區分外顯子和內含子。

      (2) 如果引物池存在2對以上的引物時,退火溫度建議都是60℃左右。

      Q7:逆轉錄時間設置為60 min,時間太長,是否可以縮短?退火、延伸這一步驟15 min,循環數20,可以把延伸時間和循環數調節一下?

      A7:逆轉錄時間與擴增的基因數目也有關,最保險的是使其進行充分的逆轉錄,60 min可以保證充分逆轉。延伸時間可以根據后期要測試的基因數量進行調節,這里設置的15 min,是為了徹底逆轉500個基因,后續客戶可根據細胞/RNA投入量進行調節;循環數20也是可以根據樣本細胞量進行調節的。

      Q8:PCR預擴增結束后的產物先稀釋了5倍,然后再稀釋10倍,為什么要這樣做呢?為什么不一步稀釋到位呢?低豐度,高豐度的基因都是稀釋50倍嗎?

      A8:稀釋5倍是作為儲存液,再稀釋10倍作為工作液。稀釋的倍數是可以根據基因的表達量和樣本量進行調整的,所以最好提前做個預實驗判斷一下。

      Q9:配置好RT-PreAmp Master Mix后,冰上可以放置多長時間?

      A9:放置時間越短越好,我們測試過冰上放置5 min左右沒有問題。

       

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