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      3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye)

      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

      藥物研發試劑

      • P115-說明書.pdf

        大?。?/span>
        2020-06-30 23:21:20
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      3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye)

      價格:
      200.0
      市場價
      200.0
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      貨號:
      P115-01/02
      所屬分類
      普通PCR
      數量:
      -
      +
      庫存:
      19996
      暫時無貨
      1
      產品詳情
      FAQ
      組分
      說明書

      3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye)

      • 醒目:含有可視化紅色染料,反應后顏色醒目,適合高通量檢測;

      • 方便:產品為2×即用型Mix,減少移液操作,使用方便;

      • 卓越的擴增性能:3G Taq DNA Polymerase具有更高的抑制劑耐受能力及擴增效率,提高實驗成功率。

      1. 可視化紅色染料,更醒目方便

      從不同試劑PCR產物的顏色可以看出,3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) (Vazyme # P115) (3號)顏色更加醒目突出。

      圖1.不同試劑PCR產物顏色示意圖

      2. 卓越的擴增性能

      以玉米基因組為模板,使用不同試劑盒分別擴增312bp、237bp、360bp及413bp目的片段(體系1-4),在4個檢測體系中,3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) (Vazyme # P115)擴增條帶清晰單一,且無明顯蛋白殘留。

      圖2 不同試劑PCR產物聚丙烯酰胺凝膠電泳示意圖

      備注:圖1,圖2中序號1-6分別對應產品:2 × Taq Master Mix for PAGE (Dye Plus) (Vazyme # P113)、2 × Taq Master Mix for PAGE (Dye Plus) (Vazyme # P114)、3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) (Vazyme # P115)、Supplier T、Supplier C及Supplier G。

       

      本產品包含3G Taq DNA Polymerase、dNTP、可視化紅色染料以及優化的緩沖體系,使用方便,減少污染,提高了檢測通量及結果的重現性。3G Taq DNA Polymerase相比于野生型Taq DNA Polymerase具有更高的抑制劑耐受能力及擴增效率。本品已加入可視化紅色染料,可在反應結束后直接進行聚丙烯酰胺凝膠電泳及瓊脂糖凝膠電泳,操作簡便。

      組分 P115-01 P115-02
      2 × 3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) 5ml 10 × 5ml

      -30 ~ -15℃保存.

      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:擴增效率低,實驗組無擴增條帶。

      A1:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解;引物設計是否合理,可利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

      (2) 模板

      長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;模板GC含量過高會導致DNA的雙鏈無法打開,此時加入PCR Enhancer(貨號P021),可以有效降低解鏈溫度;模板的GC含量過低會導致擴增效率較差,可適當延長引物長度或通過梯度PCR摸索合適的反應條件;模板中存在抑制物,特別是甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,會造成DNA脫嘌呤而影響PCR結果,建議稀釋使用或重新制備;若模板為cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度。

      (3) 擴增體系

      反應體系配制錯誤,建議重復實驗。

      (4) 反應程序

      檢查變性溫度是否準確,PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符。如果溫度過高,酶在前幾個循環就迅速失活;溫度過低則模板變性不徹底??蓪ν嘶饻囟仍O置梯度,摸索最佳的退火溫度。檢測延伸時間是否充足。

      (5) Mg2+濃度不合適

      Mg2+濃度過低可影響PCR產量甚至使PCR擴增失??;Mg2+濃度過高會降低PCR的特異性,應適當調整Mg2+濃度。

      Q2:擴增的條帶亮度不太亮。

      A2:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解。

      (2) 模板

      首先確認模板的質量,長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;如果模板沒有了,可用首次擴增產物按倍比稀釋后作為模板進行二次擴增。

       (3) 反應程序

      可嘗試使用Touch Down程序;延長延伸時間,提高循環數。

      Q3:擴增特異性差,非特異性擴增。

      A3:(1) 引物

      引物設計不夠優化。引物與靶序列有非特異性互補或自身聚合成二聚體,可降低引物濃度進行優化,必要時重新設計引物。

      (2) 模板

      模板不純,被污染,需重新制備模板。

      模板降解或過量,通過電泳檢查模板完整性及濃度,必要時重新純化模板。模板的使用量請參考說明書。

      (3) 反應程序

      反應程序不夠優化。如果出現比目的條帶小的雜帶,可通過提高退火溫度,降低循環數調整;如果出現比目的條帶大的雜帶,可縮短延伸時間、降低循環數。

      Q4:空白對照出現擴增產物。

      A4:(1) 引物設計不合理

      擴增序列與非目的擴增序列有同源性,PCR也可以擴增出非靶序列的序列。

      (2) 若擴增產物條帶大小與目的條帶一致,說明有污染

      更換新的Mix、水或引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染。

      (3) 為了避免靶序列受到整個基因組或大片段的交叉污染,操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

      (4) 為了避免靶基因受到空氣中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法減輕或消除污染。

       

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