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      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

      藥物研發試劑

      • S603-V9.2.pdf

        大?。?/span>
        2020-06-30 23:42:10
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      Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag

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      Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag

      操作簡單:可一步實現DNA的片段化和接頭連接,僅需9 h即可實現從細胞到二代測序文庫的轉化

      超高活性:兼具Protein A&Tn5活性,DNA片段化活性極高

      細胞起始量低:可兼容低至60個細胞,甚至單細胞

      純度高:蛋白純度高、核酸殘留低

      應用于CUT&Tag技術

      CUT&Tag( Cleavage Under Targets and Tagmentation)是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術,與后者相比,它具有顯著優勢,如:信噪比高,可重復性好,實驗周期短(1天實現從細胞到文庫構建),細胞投入量低等,因此,該方法適用于表觀遺傳學、腫瘤、干細胞等研究領域。 

      CUT&Tag技術的實驗流程簡單,主要包括:①收集細胞;②分別孵育一抗和二抗;③孵育經過Hyperactive pA/pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag (#S603/S602)制備的轉座子;④激活轉座子,進行DNA片段化; ⑤DNA提??; ⑥文庫擴增與純化。

      活性檢測

      如圖所示,對使用#S603反應體系(2 μg和10 μg體系)生成的轉座子進行活性檢測,針對不同的DNA投入量(50 ng和100 ng),1 μl轉座子可快速(10 min)實現DNA片段化,說明該融合酶活性很高。

      Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag是將Protein A與經過工程學改造的超高活性Tn5轉座酶進行融合,形成同時具備轉座酶與Protein A活性的新型融合酶,專門適用于蛋白質-基因組互作研究的CUT&Tag技術。與傳統的蛋白質-基因組互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有顯著優勢,該技術實驗周期短,信噪比高,可重復性好,且細胞投入量低,尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。

      組分 S603-01 (10 μg) S603-02 (20 μg)
      Hyperactive pA-Tn5 Transposase ( 500ng/μl)a 20 μl 40 μl
      5 × Tagment Buffer Lb 250 μl 500 μl
      Coupling Buffer 250 μl 500 μl
      Annealing Buffer 500 μl 1 ml

      a. #S603的質量濃度是500 ng/μl,換算成摩爾濃度是7.5 pmol/μl;

      b. 5 × Tagment Buffer L含Mg2+,用于測試制備的轉座子片段化DNA的效果,而非CUT&Tag工作Buffer。

      整個試劑盒于-85 ~ -65℃保存,干冰運輸;收到貨后Hyperactive pA-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存,其余組分可于-30 ~ -15℃保存;生成的轉座子于-30 ~ -15℃保存,有效期一年。

      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:CUT&Tag除了哺乳動物細胞外,還能兼容其他的物種嗎?

      A1:CUT&Tag Protocol適用于動物細胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等細胞需要經過特殊的處理才能進行CUT&Tag實驗,操作可以參照CUT&RUN的前端處理方式。

      Q2:S602以及S603怎么選擇?

      A2:S602 提供的是Protein G 與Tn5的融合酶,S603提供Protein A 與Tn5的融合酶;針對大多數來源的IgG抗體,二者均具有廣泛的適用性,但是Protein A對兔來源抗體的親和力相對較高,Protein G對于小鼠等部分哺乳動物抗體的親和力較高,請根據抗種屬綜合進行選擇。

      Q3:轉座子切割之后的DNA片段提取能用柱提法代替嗎?

      A3:不建議用柱提法代替,因為轉座子切割后的產物片段比較短,進行柱純化的過程會導致短片段丟失。

       

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