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      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

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      • N603-V9.1.pdf

        大?。?/span>
        2020-06-30 12:14:24
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      Discover-sc Single Cell WGA Kit

      價格:
      5000.0
      市場價
      5000.0
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      貨號:
      N603-01/02
      數量:
      -
      +
      庫存:
      19998
      暫時無貨
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      產品詳情
      FAQ
      組分
      說明書

      Discover-sc® Single Cell WGA Kit 

      樣本兼容性廣 :適用于動植物細胞,細菌或者卵裂球,滋養外胚胎層細胞,精子等樣本

      高覆蓋度 :單細胞基因組擴增后可達到95%以上的覆蓋度

      高均一度 :可用于>1 Mb的染色體拷貝數變異分析

      高保真度 :Phi29 DNA聚合酶的保真度是Taq酶的1000倍

      操作簡單 :單管反應,操作時間少于10 min,擴增產物無需純化

      高均一度

      1. 根據分布在人16條染色體上的管家基因設計引物,以人的單個293細胞全基因組擴增產物為模板進行qPCR反應。結果顯示,16對qPCR引物都能正常擴增,且檢測到的CT值均在22-28之間,表明Vazyme #N603試劑盒擴增均一性好。

      圖1.qPCR檢測結果

      2. 使用Vazyme #N603試劑盒對單細胞進行基因組擴增,并使用Vazyme轉座酶建庫試劑盒(#TD502)構建文庫。最后按照有效濃度及0.01X的測序深度Pooling 后進行Illumina Miniseq測序。下機數據結果顯示,reads在基因組各部位分布得比較均勻,表明Vazyme #N603擴增均一性很好,可用于大片段拷貝數變異分析。

      圖2.全基因組拷貝數散點分布圖

      高覆蓋度

      Discover-sc® Single Cell WGA Kit使用優化的反應體系,可以實現單細胞的全基因組擴增,且基因組覆蓋度可達95%以上,與Q*及Y*公司同類型產品相比,覆蓋度更高,性能更優越。

      圖3.N603與Q*及Y*公司同類型產品,Coverage Rate對比

      超指數的擴增原理

       

      圖4.Phi29 DNA 聚合酶介導的 MDA 示意圖

      極簡易的操作流程

      圖5.操作流程示意圖

      Discover-sc® Single Cell WGA Kit使用基于多重鏈置換擴增(MDA)的等溫擴增體系,啟用了定向進化改造的Phi29 DNA聚合酶,具有更高的擴增效率和擴增均一性,能夠在2 h內快速實現1-1000個細胞或者微量樣本的全基因組無差別擴增。單細胞基因組經N603擴增后可達到95%以上的覆蓋度,擴增產物大小在2 - 100 kb之間,平均產物長度大于20 kb,廣泛適用于胚胎植入前染色體檢測(PGS/PGD)、腫瘤細胞、干細胞、宏基因組學等研究領域。Discover-sc® Single Cell WGA Kit中所有酶和緩沖液都經過了嚴格的質量控制和功能驗證,優化的實驗體系最大程度上提升了擴增均一性,保證了穩定性和重復性。

      組分 N603-01 (24 rxn) N603-02 (96 rxn)
      Discover-sc WGA Enzyme Mix 48 μl 192 μl
      Discover-sc WGA Master Buffer 750 μl 3 ×1 ml
      Buffer D 1 ml 2 ×1 ml
      Stop Solution 1 ml 2 ×1 ml
      DTT, 1M 1 ml 1 ml
      Cell Storage Buffer 1 ml 2 ×1 ml
      H2O 1 ml 2 ×1 ml

      -30 ~ -15℃保存,如需更長期儲存請于-70℃以下存放。

      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:沒有擴增產物: 

      A1:① 樣品在收集過程中丟失: 重新收集樣品,確定不會因操作不當,造成樣品意外丟失。 

      ② 基因組DNA樣本中含有抑制反應的成分: 純化或者稀釋DNA樣品。如果樣品純化過程中有乙醇沉淀或漂洗步驟,樣品中殘留的酒精會抑制反應,純化過程中要讓酒精充分揮發。 

      ③反應溫度過高: 反應溫度應控制在30℃,過高的溫度會使聚合酶失活,如果使用具有熱蓋功能的PCR儀 進行反應,請將熱蓋溫度設為70℃。 

      Q2:擴增產生7.5 - 20 μg DNA,但檢測到部分染色體錯位或等位基因丟失: 

      A2:①對于以基因組DNA為起始模板的反應: 基因組DNA存在降解。應使用完整的DNA或使用更多量的DNA做為模板。 

      ②對于以細胞作為起始的反應:細胞存在凋亡或者細胞被固定過導致DNA降解;細胞存在難以被裂解的細胞壁(如植物細胞)不適合直接作為起始材料。 

      Q3:陰性對照有一定的產出,但下游檢測結果為陰性(如qPCR): 

      A3:無模板的陰性對照反應中,由引物的隨機聚合延伸產生的高分子量DNA產物,這種產物不影響目的產物的質量及下游分析。 

      Q4:陰性對照擴增產生7.5 - 20 μg DNA,且下游檢測結果為陽性(如qPCR): 

      A4:可能存在交叉污染,由于本反應對微量DNA非常敏感,替換掉所有可能被DNA污染的試劑及用品。

       

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