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      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

      藥物研發試劑

      • S701V10.1.pdf

        大?。?/span>
        2020-07-21 09:08:21
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      Hyperactive pA-MNase for CUT&RUN

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      S701-01/02
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      組分
      說明書

      Hyperactive pA-MNase for CUT&RUN

      操作簡單:利用酶切代替超聲破碎,僅需1天即可實現從細胞到二代測序文庫的轉化

      超高活性:DNA片段化活性極高

      細胞起始量低:可兼容低至50個細胞

      純度高:蛋白純度高、核酸殘留低

      應用于CUT&RUN技術

      CUT&RUN(cleavage under targets and release using nuclease)是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術,與后者相比,它具有顯著優勢,如:信噪比高,可重復性好,實驗周期短(1天實現從細胞到文庫構建),細胞投入量低等,因此,該方法適用于表觀遺傳學、腫瘤、干細胞等研究領域。 

      CUT&RUN技術的實驗流程簡單,主要包括:

      1.收集細胞并將細胞與連有伴刀豆蛋白A的磁珠進行結合;

      2. 孵育一抗;

      3. 孵育Protein A/G MNase;

      4. 激活Protein A/G MNase進行片段化;

      5.DNA提??;

      6.文庫構建。

      活性檢測

      如圖所示,針對300 ng質粒DNA,加入不同質量的pA-MNase于37℃進行酶切反應10 min。只需要0.5 ng pA-MNase即可實現300 ng質粒DNA片段化,說明該融合酶活性很高。

      Hyperactive pA-MNase for CUT&RUN是將Protein A與經過工程學改造的超高活性MNase進行融合,形成同時具備MNase外切酶活性與Protein A活性的新型融合酶,專門適用于蛋白質-基因組互作研究的CUT&RUN技術。與傳統的蛋白質-基因組互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&RUN具有顯著優勢,該技術實驗周期短,信噪比高,可重復性好,且細胞投入量低,尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。

      組分

      S701-01

      S701-02

      Hyperactive pA-MNase (500ng/μl)

      20 μl

      40 μl

      于-30 ~ -15℃保存,-20 ~ 0℃運輸。

      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:CUT&RUN除了哺乳動物細胞外,還能兼容其他的物種嗎?

      A1:CUT&RUN Protocol適用于動物細胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等細胞需要經過特殊的處理才能進行CUT&RUN實驗,具體操作可以參考已經發表的文獻。

      Q2:pA-MNase切割后的DNA片段提取方式有要求嗎?

      A2:pA-MNase切割后的DNA,可以選擇柱提法或者沉淀法。

       

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