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      • PD10121.1.pdf

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        2021-05-21 13:37:14
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      One Step Mouse Genotyping Kit

      OneStepMouseGenotypingKit動物組織直接進行?PCR反應的試劑盒基于蛋白酶K的特制裂解液。裂解產物直接用于PCR擴增,無需提取基因組。?廣泛適用于2kb以內目標片段擴增,并適用于4對引物以內的多重PCR反應。使用?OneStepMouseGenotypingKit以同一個粗提樣品為模板,擴增17個不同的基因(長度為200bp-800bp之間)。所有片段均可以實現特異性高產量擴
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      貨號:
      PD101-01
      所屬分類
      直接擴增PCR
      數量:
      -
      +
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      9999
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      1
      產品詳情
      FAQ
      組分
      說明書

      One Step Mouse Genotyping Kit

      動物組織直接進行 PCR 反應的試劑盒

      基于蛋白酶 K 的特制裂解液。

      裂解產物直接用于PCR擴增,無需提取基因組。

      廣泛適用于2 kb以內目標片段擴增,并適用于4對引物以內的多重PCR 反應。

      使用 One Step Mouse Genotyping Kit 以同一個粗提樣品為模板,擴增17個不同的基因 (長度為 200 bp-800bp 之間)。所有片段均可以實現特異性高產量擴增。

      M: DL2,000 Plus DNA Marker

      本試劑盒包含整套的DNA粗提取以及PCR擴增體系,適用于小鼠基因型快速鑒定 (Rapid Genotyping)??捎糜趶男∈笪舶?、耳朵以及腳趾等組織中快速釋放基因組DNA,產物可直接進行PCR擴增,無需勻漿、破碎、過夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式純化等操作,極大縮短了實驗耗時。試劑盒中配有2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus),包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及優化的緩沖體系,PCR反應時只需加入引物和模板即可進行擴增,減少了開管/移液等操作,顯著降低了樣品交叉污染并且提高了檢測通量和結果的重現性。獨特的保護劑使得TaqPlus Master Mix經過反復凍融后仍可保持穩定的活性。體系中預混有電泳緩沖液和染料,可在反應結束后直接進行電泳,使用方便快捷。

      組 分

      PD101-01

      1 × Mouse tissue Lysis Buffer

      40 ml

      Proteinase K

      800 μl

      2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus)

      5 ml

      25 mM MgCl2

      500 μl

      5 × PCR Enhancer

      2 ml

      1 × Mouse tissue Lysis Buffer 4℃保存;其余組分-20℃保存。

      關鍵詞:
      動物組織直接進行PCR反應的試劑盒
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:PD101試劑盒中Proteinase K的儲存以及裂解的注意事項。

      A1:Proteinase K存儲條件為 -20℃。若經常使用,可將Proteinase K分管保存在-20度,防止反復凍融。裂解時可以將Proteinase K與Lysis Buffer混勻后放在常溫下即可,再取小鼠組織,其他可參照說明書。

      Q2:PD101試劑盒中的2 × Taq Plus Master Mix 中是否有Mg2+?另外的MgCl2如何用?

      A2:2 × Taq Plus Master Mix 中有Mg2+,濃度為1.5 mM。關于MgCl2的使用,可在擴增效率不佳的時候,用來調節反應條件,每次可增加0.5mM。

      Q3:PD101試劑盒能否做其他物種?

      A3:確定可以做大鼠和小鼠,像其他昆蟲,哺乳動物也可以,但不能保證,只能試一試。也可嘗試用我們公司產品 P505,這款酶的直擴能力超強。

      Q4:使用PD101,裂解孵育之后小鼠尾巴形態沒變,和最開始一樣。

      A4:這是正常的現象。加入裂解液孵育之后已經有部分基因組DNA釋放出來了,小鼠尾巴的形態改變不大。

      Q5:PD101裂解組織后的裂解液可以用NanoDrop測DNA濃度嗎?

      A5:不可以,因為裂解組織后的裂解液中的東西比較復雜,有buffer、蛋白酶K,而且DNA的濃度低,用NanoDrop測量容易虛高。

      Q6:使用PD101,在一個反應體系中加入兩對引物,擴增效果差。

      A6:可能兩對引物會互相干擾,建議單獨擴增。若一定要在同一個體系中進行,建議調整兩對引物使用的比例,如果重新設計引物,在保證引物特異性的前提下,使四條引物的Tm值盡量接近,差值不要太大(2-3℃);如果不重新設計引物,也可以適當調整退火溫度,同時,適當延長退火時間(30s-1 min)。

      Q7:擴增產量低或者無法擴增。

      A7:(1) 組織中的一些PCR抑制物混入裂解液中:可嘗試將裂解產物稀釋10倍后再進行PCR擴增;

      (2) DNA釋放效率較差:可嘗試延長55℃孵育時間至3 h;

      (3) Proteinase K沒有充分滅活:滅活步驟在沸水浴中進行;

      (4) PCR循環數不夠:一般而言,30~35個循環已經足以擴增足量的產物。然而對于某些片段,提高循環數可以獲得更好的擴增效果;

      (5) 擴增反應退火溫度設置太高:降低退火溫度(每次降低3℃);

      (6) PCR引物錯誤:設置以純化過的小鼠基因組為模板的陽性對照反應。

      Q8:非特異性產物很多。

      A8:(1) PCR反應體系在室溫下配制:在冰水浴中配制反應體系可顯著降低非特異性擴增;

      (2) 擴增反應退火溫度設置太低:提高退火溫度(每次提高2℃);

      (3) PCR引物錯配嚴重:重新設計引物。

      Q9:陰性對照也出現擴增。

      A9:PCR反應體系出現污染:逐個更換組織裂解體系、PCR擴增體系中的每一個組分。

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