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      2 × Phanta Flash Master Mix(Dye Plus)

      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

      藥物研發試劑

      • P520-說明書-V21.1.pdf

        大?。?/span>
        2021-04-09 17:13:10
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      2 × Phanta Flash Master Mix(Dye Plus)

      價格:
      615.0
      市場價
      615.0
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      貨號:
      P520-01/02/03
      所屬分類
      高保真PCR
      數量:
      -
      +
      庫存:
      2995
      暫時無貨
      1
      產品詳情
      FAQ
      組分
      說明書

      2 × Phanta® Flash Master Mix(Dye Plus) 

      擴增速度最快的高保真酶

       

       

      極速擴增:1 h即可完成10kb以內片段的擴增

       

       

      1.極速擴增

      使用2 × Phanta Flash Master Mix(Vazyme #P510,簡稱P510)和2 × Phanta Flash Master Mix (Dye Plus)(Vazyme #P520,簡稱P520)以及市售其他品牌高保真酶(TB1、TB2),采用1 sec/kb的延伸速度擴增353 bp、873 bp的目的片段,采用4 sec/kb和5 sec/kb的延伸速度擴增7,140 bp的目的片段。結果顯示,P510和P520均可成功擴增。

       

       

      2. 高保真度

      采用LacI分析方法測定不同聚合酶的擴增保真度,結果顯示,Phanta Flash(P510、P520)的保真度可達Taq DNA Polymerase的81倍。

       

       

      3.高特異性

      使用P510、P520和市售其他品牌高保真酶,按照各自說明書推薦體系和程序擴增不同長度片段,結果顯示,P510和P520與其他品牌高保真酶相比,擴增特異性更高。

       

       

       

       

       

      2 × Phanta Flash Master Mix (Dye Plus) 不僅具有極速延伸的特點(≤1 kb片段,1 sec/kb;≤10 kb片段,4 - 5 sec/kb;>10 kb片段,10 sec/kb),同時也擁有超高的保真度(其保真度是Taq DNA Ploymerase的81倍)。通過極致的緩沖優化,本產品擴增特異性進一步提高,并且對粗品(細菌、真菌、植物/動物組織裂解產物、全血樣本等)、含尿嘧啶模板和高GC體系均具有優異的擴增性能。2 × Phanta Flash Master Mix (Dye Plus) 只需加入模板和引物即可進行擴增,使用方便;并且含電泳指示劑,PCR反應完成后無需額外添加loading buffer,可直接點樣進行電泳。

       

       

      組分

      P520-01

      P520-02

      P520-03

      2 × Phanta® Flash Master Mix(Dye Plus)

      1 ml

      5×1 ml

      15×1 ml

       

      -30 ~ -15℃保存


       

       

      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:擴增效率低,實驗組無擴增條帶。

      A1:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解;引物設計是否合理,可利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

      (2) 模板

      長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;模板GC含量過高會導致DNA的雙鏈無法打開,此時加入PCR Enhancer(貨號P021),可以有效降低解鏈溫度;模板為粗品,存在抑制物,建議降低模板濃度(稀釋使用;若樣本為植物葉片,要確保植物為非多糖多酚植物,取新鮮幼嫩的葉片,并將葉片面積剪小,如黃槍頭尖部面積大?。?;若模板為cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度。

      (3) 酶

      反應所用的酶因保存或運輸不當而失活,建議更換新酶或用另一來源的酶重新實驗。

      (4) 擴增體系

      反應體系配制錯誤,建議重復實驗。

      (5) 反應程序

      檢查變性溫度是否準確,PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符,如果溫度過高,酶在前幾個循環就迅速失活,溫度過低則模板變性不徹底;若模板為酵母菌,可將預變性時間延長10min;退火溫度不合適,可對退火溫度設置梯度,摸索最佳的退火溫度;如果目的片段較長,可嘗試Touch Down 程序;檢查延伸時間是否充足。

      Q2:擴增的條帶亮度不太亮。

      A2:(1) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解。

      (2) 模板

      首先確認模板的質量,長期放置、反復凍融會導致模板斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的DNA雙鏈作為模板;如果模板沒有了,可用首次擴增產物按倍比稀釋后作為模板進行二次擴增。

      (3) 反應程序

      可嘗試使用Touch Down程序;延長延伸時間,提高循環數。

      Q3:擴增特異性差,非特異性擴增。

      A3:(1) 引物

      引物設計不夠優化。引物與靶序列有非特異性互補或自身聚合成二聚體,可降低引物濃度進行優化,必要時重新設計引物。

      (2) 模板

      模板不純,被污染,需重新制備模板。

      模板降解或過量,通過電泳檢查模板完整性及濃度,必要時重新純化模板。模板的使用量請參考說明書。

      (3) 反應程序

      反應程序不夠優化。如果出現比目的條帶小的雜帶,可通過提高退火溫度,降低循環數調整;如果出現比目的條帶大的雜帶,可縮短延伸時間、降低循環數。

      Q4:擴增產物跑膠條帶彌散或拖尾。

      A4:(1) 膠

      制膠時要使膠完全融化。

      (2) 引物

      檢查人工合成的引物是否因存儲條件不當而降解。

      (3) 模板

      模板降解或過量,可通過電泳檢查模板完整性及濃度,必要時重新制備模板。模板的使用量請參考說明書。如果目的條帶較長,模板是cDNA,要確認逆轉錄所用RNA的純度及完整度,逆轉錄時不加隨機引物重新逆轉錄。

      (4) 反應程序

      反應程序不夠優化。退火溫度不合適,可對退火溫度設置梯度,摸索最佳的退火溫度;嘗試Touch Down 程序。

      Q5:空白對照出現擴增產物。

      A5:(1) 引物設計不合理

      擴增序列與非目的擴增序列有同源性,PCR也可以擴增出非靶序列的序列。

      (2) 若擴增產物條帶大小與目的條帶一致,說明有污染

      更換新的Mix、水或引物重復實驗。反應體系在超凈工作臺內配制,減少氣溶膠污染。

      (3) 為了避免靶序列受到整個基因組或大片段的交叉污染,操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

      (4) 為了避免靶基因受到空氣中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法減輕或消除污染。

      Q6:高保真酶擴增保真性差,存在突變。

      A6:高保真酶在PCR時擴增產物有突變,可以從以下幾點來分析:

      (1) 模板本身存在突變

      檢查模板,若模板是質粒,建議送質粒去測序;若模板是cDNA,建議重復實驗,如果仍有突變,可能是cDNA有問題,建議重新制備cDNA,制備cDNA前檢測RNA的完整度及純度。

      (2) 模板反復凍融

      重新制備模板。

      (3) 模板長時間在紫外光下照射,引入突變

      切膠回收過程中避免長時間在紫外光下照射。

      (4) 基因序列與NCBI上的不一致

      建議再重復一次送去測序,若結果和上一次一樣,說明序列可能和NCBI上的不一致。

      (5) 少量序列存在非嚴謹序列

      有相似重組序列,導致重組錯位。

      Q7:條帶大小與理論不符。

      A7:(1) 實驗體系污染

      建議使用全新的試劑和槍頭,對工作臺進行清潔。

      (2) 模板或引物使用錯誤

      建議更換模板和引物。

      (3) 存在基因亞型

      建議對研究的基因進行序列分析和BLAST研究。

      Q8:逆轉錄后的產物cDNA作為模板,使用高保真酶,一次應該加多少體積?

      A8:說明書建議cDNA模板使用量為1-5μl(不超過PCR反應總體積的1/10),可在這個范圍內嘗試不同的使用量,摸索最佳使用量。

      Q9:高保真酶擴增完的產物是否帶A,若后面要做TA克隆該如何進行?

      A9:高保真酶擴增完的產物不帶A,若后面做TA克隆可用普通的Taq酶進行加A反應。
      具體加A方法:在10μl體系中,加入純化后的PCR產物1-7μl,同時加入1μl 10×Taq Buffer(含MgCl2)、0.5μl 10mM dNTPs、0.2μl Taq DNA聚合酶(不加引物),最后用超純水補足體系,72℃反應10-15min即可。

      Q10:帶顏色的PCR產物是否影響酶切效果?

      A10:經測試,帶顏色的PCR產物不會影響酶切效果。
       

      組分

      P520-01

      P520-02

      P520-03

      2 × Phanta® Flash Master Mix(Dye Plus)

      1 ml

      5×1 ml

      15×1 ml

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