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      • MQ101- 說明書.pdf

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        2021-02-26 09:23:19
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      miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix

      miRNAUniversalSYBR?qPCRMasterMixmiRNA染料法定量專用預混液超高的擴增特異性:基于化學法熱啟動的AceTaq??DNAPolymerase,95°C前完全封閉酶活,配以專利特異性促進因子Exactor,擴增更特異。優越的反應體系:最適的Buffer組分及濃度,更適用于microRNA的逆轉錄及qPCR實驗。寬廣的平臺兼容:miRNAUniversalSYBR??q
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      miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix

      miRNA染料法定量專用預混液

      超高的擴增特異性:基于化學法熱啟動的AceTaq® DNA Polymerase,95°C前完全封閉酶活,配以專利特異性促進因子Exactor,擴增更特異。

      優越的反應體系:最適的Buffer 組分及濃度,更適用于microRNA的逆轉錄及qPCR 實驗。

      寬廣的平臺兼容:miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix中添加通用型ROX使得mix能夠在兼容不同平臺qPCR儀器,而無需進行ROX濃度調整。

      圖1. 超高的擴增特異性

      microRNA 序列短,同一家族不同成員序列極其相似,有些僅有單個堿基差別,因此特異性對 microRNA 定量至關重要。miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix 以化學法熱啟動 AceTaq ® DNA Polymerase 為核心酶,配以優化的Buffer,能夠最大限度區分 microRNA 同一家族不同成員間單個堿基的差異,實現高特異性定量。

      圖2. 卓越的擴增靈敏度

      以 HeLa 細 胞 Total RNA 為 模 板 逆 轉 錄, 擴 增 hsa-miR-15、hsa-miR-29、hsa-miR-155、hsa-miR-200 基 因; 以 小 鼠 肝 臟組織 Total RNA 樣本進行逆轉錄,擴增 mmu-miR-16、mmu-miR-20、mmu-miR-21 基因。結果顯示,與同類產品相比,miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 配 套 miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101) 的反應體系,均有優異的表現。

      圖3. 寬廣的平臺兼容性

      使用miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix(Vazyme #MQ101) 在不同qPCR 儀上擴增同一基因,在StepOnePlusTM、QuantStudio TM 3、CFX Connect 均具有優秀的定量結果,說明Vazyme #MQ101 儀器適用性廣,無需針對不同儀器調整 ROX 濃度。

      本產品是使用SYBR® Green I嵌合熒光法進行miRNA定量反應的專用預混液。由于miRNA序列短,且同一家族的miRNA序列往往高度相近,故在定量時對特異性要求極高。本品基于化學法熱啟動的AceTaq® DNA Polymerase,配以優化的Buffer,能夠極大地減少非特異性擴增;同時,特殊的ROX Reference Dye,使得預混液適應于所有qPCR儀器,無需在不同的儀器上調整ROX濃度,只需在配制反應體系時加入引物和模板即可進行擴增。

      組分

      MQ101-01

      125 rxn (20 μl reaction)

      MQ101-02

      500 rxn (20 μl reaction)

      2 x miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mixa

      1.25 ml

      4 x 1.25 ml

      MQ Primer R(10um)b

      70ul

      250ul

      a.包含dNTP,Mg2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I,Specific ROX Reference Dye等。

      b.序列為AGTGCAGGGTCCGAGGTATT

      - 20℃避光保存

      關鍵詞:
      miRNA Universal SYBR? qPCR Master Mix
      miRNA染料法定量專用預混液MQ101-01
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1、采用其他軟件設計的莖環逆轉錄引物及定量引物,能否使用Vazyme #試劑盒(MR101+MQ101)?

      A1:可以的。逆轉錄時可參照說明書直接投入其他軟件設計的莖環逆轉錄引物(2μM濃度),且后續定量實驗直接投入相應的定量上下游引物即可。注:若其他軟件默認的莖環引物與Vazyme miRNA 引物軟件默認的相同,后續搭配MQ101無需合成反向引物,可以使用MQ101自帶的mQ Primer R;若莖環引物序列不同,則MQ101提供的mQ Primer R無需使用,需合成正反向引物。

      Q2、內參是否需要設計莖環引物及如何逆轉錄和定量的引物如何使用?

      A2:若選擇U6等較長的基因作為內參基因,由于序列相對較長,無需設計莖環逆轉錄引物,直接使用常用的Primer Premier 5等軟件設計即可,逆轉錄時投入內參下游引物(2μM濃度),且后續定量實驗直接投入內參的上下游引物即可。如果選擇長度較短的miRNA作為內參,需要設計莖環引物進行逆轉錄,推薦使用Vazyme miRNA 引物設計軟件設計逆轉錄引物和qPCR引物。

      Q3、如果要研究多個miRNA定量實驗,是不是每個miRNA均要單獨設計一條莖環引物進行逆轉錄?

      A3:是的,針對每個miRNA都要設計一條莖環逆轉錄引物,一管反應中只能逆轉一個miRNA(內參也是一樣),即不同逆轉錄引物均需要分管逆轉錄。

      Q4、在逆轉錄時,多個莖環逆轉錄引物/內參引物是否可以在同一管中進行?

      A4:不推薦。在一管中同時投入多個莖環逆轉錄引物進行多個miRNA逆轉錄時,不同特異性莖環引物莖環結構之間會產生相互干擾和影響。

      Q5、逆轉錄體系應該投入多少RNA?

      A5:如果提取的是Total RNA,MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量,但是不同miRNA表達豐度不同,建議盡量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA,逆轉投入量參考1/10-1/5 total RNA的量加入,具體還是要根據目標miRNA的豐度來調整。

      Q6、miRNA為什么要合成莖環引物?

      A6:因為miRNA較短,如果使用普通逆轉錄和定量方法,無法設計定量引物,需要在逆轉錄階段將cDNA延長

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