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      Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

      科學研究試劑

      高通量測序文庫構建試劑

      藥物研發試劑

      • C215-說明書V20.1.pdf

        大?。?/span>
        2020-11-23 10:50:06
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      Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

      MutExpress?MultiSFastMutagenesisKitV2??一步法多點突變試劑盒?●??Phanta?MaxSuper-FidelityDNAPolymerase提供突變率最低的高保真PCR●?Phanta?MaxSuper-FidelityDNAPolymerase卓越的長片段擴增能力,廣泛適用于20kb以內任何質粒的擴增●?擴增以指數方式進行,模板使用量極低,有利于原始甲基化
      價格:
      1280.0
      市場價
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      貨號:
      C215-01/02
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      產品詳情
      FAQ
      組分
      說明書

      Mut Express® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

      一步法多點突變試劑盒

      Phanta® Max Super-Fidelity DNA Polymerase提供突變率最低的高保真PCR

      Phanta® Max Super-Fidelity DNA Polymerase卓越的長片段擴增能力,廣泛適用于20 kb以內任何質粒的擴增

      擴增以指數方式進行,模板使用量極低,有利于原始甲基化模板的徹底降解

      ClonExpress®快速克隆系統高效環化PCR產物

      DpnI消除原始模板污染

      可一步實現目標質粒上三至五個不連續位點(相距超過50 bp)的定點突變

      提供在線引物設計軟件CE Design

      使用Mut Express® MultiS 進行不連續三點突變實驗流程:

      以待突變位點A、B、C 為界,將質粒分為AB、BC 和CA 三段。在每個待突變位點處設計部分反向互補的引物。以原始質粒為模板,分別擴增AB 段(A Forward Primer 和B Reverse Primer)、BC 段(B Forward Primer 和C Reverse Primer) 和CA 段(C Forward Primer和A Reverse Primer) (I)。擴增產物經DpnI消化(I) 后,進行重組環化(II)。重組產物直接進行轉化即可完成定點突變(III)。

       

      Mut Express® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 是基于ClonExpress® 快速克隆技術的多位點定點突變系統。使用本試劑盒,可一次性向目標質粒上三至五個不連續位點同時引入定點突變。該試劑盒由Phanta® Max Super-Fidelity DNA Polymerase 擴增模塊和ClonExpress®快速克隆模塊組成。Phanta® Max Super-Fidelity DNA Polymerase 超高的保真度顯著降低了擴增過程中引入新突變的可能性。ClonExpress® 快速克隆系統利用高效同源重組技術替代了傳統的退火成環反應,大大提高了環化效率。使用Mut Express® MultiS 定點突變試劑盒進行DNA 定點突變時,引物設計靈活、模板需求量低,且如擴增產物特異,DpnI 消化后可不進行DNA 純化而直接用于重組反應。專門針對多位點定點突變而優化的重組酶、高度優化的反應緩沖液、快捷的操作流程以及驚人的定點突變效率,使得Mut Express® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 成為DNA 多點突變首選試劑盒。

      組分

      C215-01 (10 rxn)

      C215-02 (25 rxn)

      2 × Max Buffer

      1.25 ml

      3 × 1.25 ml

      dNTP Mix (10 mM each)

      50 μl

      125 μl

      Phanta® Max Super-Fidelity DNA Polymerase

      50 μl

      125 μl

      DpnI (10 U/μl)

      50 μl

      125 μl

      5 × CE MultiS Buffer

      40 μl

      100 μl

      Exnase® MultiS

      20 μl

      50 μl

      - 20℃儲存

      關鍵詞:
      C215-01/02
      一步法多點突變試劑盒
      未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

      Q1:質粒模板無法正常擴增。

      A1:(1) 引物設計有誤:核對引物設計方案;

      (2) 擴增體系配制錯誤:重復實驗;

      (3) 擴增反應條件不優化:調整Mg2+濃度、酶量、擴增程序;

      (4) 模板質粒質量偏差:長期放置、反復凍融會導致模板質粒斷裂、開環或降解,應使用新鮮制備的質粒作為模板。

      Q2:平板上長不出克隆或者克隆數很少。

      A2:(1) 感受態效率低:使用新制備或妥善凍存的感受態細胞,確保轉化效率需107 cfu/μg。每次可設置一組轉化質粒的對照試驗,以檢測感受態細胞的轉化效率;

      (2) 重組反應體系中DNA量不足或比例不佳(雙堿基突變):盡量按照說明書推薦的量配置重組體系。請務必預先檢測DpnI消化產物的濃度。常用的吸光度測量法極易受DNA純度、DNA稀釋液pH等因素影響,測定值和DNA實際濃度往往偏差非常大;

      (3) 重組環化反應體系中DNA不純,抑制反應:未純化DpnI消化產物加入重組體系內的總體積不應超過4ul(反應體系體積1/5)。嘗試對DpnI消化產物進行膠回收純化。重組反應體系中應盡量避免金屬絡合劑(如EDTA)的帶入。因此,我們推薦您將DNA純化產物溶解在pH8.0的ddH2O中保存(常規膠回收試劑盒中的洗脫液可用8.0的ddH2O替代),請勿使用TE進行DNA保存;

      (4) 感受態細胞中加入了過多的反應產物:反應產物的轉化體積不應超過感受態細胞體積的1/10,否則會降低轉化效率; 

      (5) 出現轉化抑制效應:當轉化的DNA濃度太高時,會抑制轉化反應,將重組反應產物稀釋5倍后取1/5進行轉化。

      Q3:定點突變未正確完成。

      A3:(1) 引物設計錯誤:核對引物設計方案;

      (2) 擴增反應所用模板為非甲基化的質粒:DpnI只能識別甲基化DNA,請務必使用從甲基化酶無缺陷的宿主菌中擴增的質粒作為PCR模板;

      (3) 擴增反應使用過多的模板質粒:對大多數質粒,1ng模板量已足以使擴增反應正常進行,過多的質粒模板將會導致DpnI消化不完全,降低突變成功率。

      Q4:非目標位點突變。

      A4:(1) 模板質粒攜帶未知位點突變:測序確認模板質粒序列正確性;

      (2) 擴增循環數過多:為了防止擴增過程中引入非目標突變,擴增循環數不宜超過35。如果擴增效率良好的話,推薦擴增循環數應不超過30。

      這是描述信息
      Ultra GelRed (10000 ×)
      700.00
      700.00
      DL5000 DNA Marker
      60.00
      60.00
      DL 15000 DNA Marker
      75.00
      75.00
      100 bp DNA Ladder
      90.00
      90.00
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